脱脂黑水虻虫粉饵料对对虾的生长性能、营养保留、抗氧化和免疫反应、消化酶活性和肝脏形态的影响

摘要

脱脂黑水虻虫粉(DBSFLM)是鱼类养殖重要的替代蛋白质成分，但其对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长和健康的影响尚不清楚。本研究通过56天的饲养试验，研究了DBSFLM部分替代鱼粉对对虾生长性能、身体成分、营养沉积、血液代谢产物、抗氧化和免疫反应、消化酶活性及肝脏形态的影响。实验使用DBSFLM替代0% (G0)、15% (G15)、30% (G30)、45% (G45)、60% (G60)和80% (G80)的鱼粉，配制6种等氮等能饲料。每种饲料随机分成4个重复组，每箱40尾。对虾每天喂食三次，实验末期采集血液样本，分析抗氧化和非特异性免疫酶活性。采集肝、胰脏和肠道标本，测定消化酶活性和肝脏形态。与其他各组相比，G80组的终重、增重和特定生长率较低(p <0.05)，饲料系数较高(p <0.05)。随着饲料中DBSFLM的增加，虾体和肌肉中粗蛋白质(CP)和脂质沉积均降低(p < 0.05)。G80组血清总胆固醇降低(p < 0.05)，总抗氧化能力提高(p < 0.05); G45-G80组血清丙二醛水平低于G0-G30组(p < 0.05)。肝脏和肠道消化酶活性未受处理的影响(p > 0.05)。G60和G80肝细胞出现不同程度的空泡变性、肝小体萎缩和星形管腔丢失。结果表明，DBSFLM可替代60%的鱼粉，且对对虾的生长性能、抗氧化和免疫酶活性及消化酶活性均无不良影响。

前言

黑水虻(Hermetia illucens)是一种很有希望用于动物饲料的昆虫，其幼虫饵料(BSFLM)具有与鱼粉相似的必需氨基酸结构。作为一种潜在的新型蛋白质来源，BSFLM在水产饲料中可部分或完全替代鱼粉，且不影响鱼粉的生长性能。脱脂BSFLM可以分离用于动物饲料的昆虫蛋白和用于饲料和生物燃料的昆虫油。为了减少生化成分的变化和降低脂质氧化的风险，将黑水虻虫粉加工成富含蛋白质的脱脂粕和油馏分已成为一种常见的做法。近年来，脱脂黑水虻虫粉(DBSFLM)对大西洋鲑鱼(Salmo salar)、虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)、剑鲤(Cyprinus carpio var. Jian)、日本鲈鱼(Lateolabrax japonicus)和非洲鲶鱼(Clarias gariepinus)的影响得到了很好的评价。例如，饲粮中添加DBSFLM可提高日本鲈鱼(Lateolabrax japonicus)的抗氧化能力，并通过降低血清脂质浓度和上调脂蛋白脂肪酶和激素敏感脂肪酶的转录水平，抑制其肝脏脂质沉积。

凡纳滨对虾作为一种具有重要商业价值的甲壳类动物，在世界上被广泛养殖，它占世界和中国养殖虾产量的70%和77%以上。然而，关于黑水虻虫粉对凡纳滨对虾养殖的影响的信息却很少。鉴于对虾的经济价值，这方面的研究十分必要。因此，本研究旨在研究脱脂黑水虻虫粉部分替代鱼粉对对虾生长性能、体组成、抗氧化和免疫反应、消化酶活性及肝脏形态的影响。

材料与方法

实验饲料主要蛋白质来源为鱼粉、脱脂黑水虻幼虫粉、豆粕、虾粉和花生糠，主要脂质来源为鱼油、大豆油和大豆卵磷脂。六个等氮等能的饲料配方包含约40%粗蛋白和18 KJ / g DM总能量以满足对虾生长的营养需求 (表1)。鱼粉的营养成分如下:干物质(DM) 91.2%,粗蛋白(CP) 65.9%,粗脂肪(CL) 8.1%,灰分14.6%。在餐厨垃圾底物上饲养的黑水虻幼虫(8日龄)由广州Fishtech Biotechnology有限公司提供，成分为DM 93.4%， CP 42.2%， CL 9.1%，灰分18.6%，甲壳素6.8%。黑水虻幼虫(BSFL)首先在120°C处理20分钟，碾碎。然后用体积比为2：1的95%乙醇沉淀10分钟，在通风柜下风干24小时，置于-20℃保存直至使用。在基础饲料中以0% (G0)、15% (G15)、30% (G30)、45% (G45)、60% (G60)和80% (G80)的比例添加DBSFLM替代鱼粉，饲料包合量分别为0、58.7、117.5、176.2、234.9和313.2 g/kg。试验饲粮的脂肪酸和氨基酸分布情况分别见表2和表3。

本试验在自然光条件下的室内循环水养殖系统中进行。将960尾初始体重为1.1±0.02g的凡纳滨对虾随机分为6组(每组4个重复)，放入24个350L、80cm直径× 70cm高的玻璃纤维圆柱形养殖池中，每个养殖池40尾。每天3次(08:00、14:00和20:00)投喂至表观饱足，试验期56天。每天喂食前，将未食用的饲料和粪便吸出。每天记录每个水箱的饲粮量，在饲喂1.0 h后将剩余的饲料虹吸出来，分析干物质，并从提供的饲料中减去(DM基础)，计算实际采食量(FI)。饲养试验结束后，先禁食12h，然后采样。对每个养殖池中的所有虾进行计数和称重，测量最终体重(FBW)，并计算增重(WG)、FI、饲料系数(FCR)和特定生长率(SGR)。每个水族箱随机收集4只虾，置于-20℃保存，用于虾体成分分析。用肝素化注射器取虾的腹窦血样，室温保存30 min, 4℃8000g离心10 min。生成的血清立即储存在- 80°C，用于后续血清代谢物、抗氧化和非特异性免疫指标的测定。采血后，每个养殖池随机选取6只虾，采集条件因子(CF)和脏体指数(VSI)数据。另外采集6只虾的肝胰腺和肌肉样本，分析肝脏形态和肌肉组成。每箱取4只虾的肝胰脏和肠，切碎后均质于10体积(w/v)的冰生理盐水中，4℃6000g离心20min，取上清液置于-20℃保存，用于胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性分析。

结果

1.生长性能

饲喂G80的对虾的FBW、WG、SGR和SR均低于其他各组(p < 0.05)， FCR高于其他各组(p < 0.05)(表4)。各组对虾的IBW、FI、CF和VSI均相似(p > 0.05)。

2.机体组成及养分保留

随着饲粮DBSFLM的增加，对虾全虾体和肌肉CP降低(p < 0.05)。饲喂G60和G80的虾全身CP低于饲喂G15-G45的虾(p < 0.05)，肌肉CP低于饲喂G0-G45的虾(p < 0.05)。与G0-G45相比，G60和G80的蛋白质沉积和脂质沉积均较低(p < 0.05)(表5)。

3.血清代谢物、抗氧化和非特异性免疫反应

与其他饲料相比，G80组的CHO降低(p < 0.05)， TAOC升高(p < .05)。G45-G80组MDA含量低于G0-G30组(p <0 .05)。处理对ALB、GLOB、TG、ALT、AST、GLU、UA、SOD、GPx、PO、AKP、ACP和LZM无影响(p > 0.05)(表6)。

4.消化酶活性

各处理对虾肝胰脏和肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均无影响(p > 0.05)(表7)。

5.肝形态学检查

肝脏形态见图1。G0-G45肝细胞结构正常，肝小体排列整齐，基膜完整，有星形管腔，吸收细胞丰富，未见明显炎症细胞浸润。

总结：脱脂黑水虻幼虫粉可替代60%以下的鱼粉，且对对虾的生长性能、抗氧化和免疫酶活性及消化酶活性均无不良影响。

Evaluation of defatted Hermetia illucens larvae meal for Litopenaeus vannamei: effects on growth performance, nutrition retention, antioxidant and immune response, digestive enzyme activity and hepatic morphology[J]. Aquaculture Nutrition, 2021.